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Service de Speed Congenic
Le développement des animaux transgéniques produit des modèles avec le fond génétique peu convenable ou mélangé les rendant inadéquats pour des études biomédicales. Historiquement, pour résoudre ce problème, les animaux mutants sont croisés en retour (backcross) avec des animaux de fond génétique désiré. Dans le processus de croisement, la présence de la mutation est testée et on s'attend à ce qu'après 10 générations (de F1 à N10) le fond génétique soit pur excepté pour la mutation (souris congenic). 2 ou 3 ans sont nécessaires pour compléter le processus; face à la concurrence des projets de recherches et la course au résultat, un tel laps de temps peut être inacceptable. Le but du procédé speed congenic est de diminuer de manière significative le temps requis pour transférer une mutation d'intérêt à partir d'un fond génétique (génome donneur) à l'autre (génome receveur en général consanguin (inbred)).
Durant le processus de speed congenic, la transmission de la mutation est tout d'abord testée à chaque génération, mais en plus le génome est analysé pour la présence de micro-satellites polymorphes entre les lignées donneuses et receveuses. En utilisant cette technique, seulement 5 générations (de F1 à N5) sont nécessaires pour obtenir une souris congenic. Le processus est complet en 10 à 14 mois et le fond génétique est au moins à 99% composé du génome receveur.
Pour chaque projet, un panel de 100 microsatellites polymorphes situés tout le long du génome et séparés par 15 centimètres est testé. Le génome de 5 souris hétérozygotes par génération est analysé et l’animal dont le pourcentage en génome receveur est le plus élevé est employé comme fondateur pour créer la génération suivante. Le choix du panel de microsatellite est construit à partir des bases de données disponibles et tient compte de la localisation chromosomique de la mutation. Dans le cas de l'indisponibilité d'un panel couvrant le génome entier l'analyse de microsatellite peut être combinée avec celle de SNP spécifique.
BV Transgenic Services peut fournir un service complet de la maintenance de la colonie à l'analyse de microsatellite.
Les animaux sont maintenus dans des isolateurs à film flexibles ou en cages individuelles ventilées. Des échantillons de tissu, habituellement bouts de queue, sont traités pour l'extraction d'ADN et analysés par PCR pour détecter la présence de la mutation selon le protocole du client, et les animaux hétérozygotes pour la mutation sont testés pour l’homozygotie des microsatellites du génome receveur. Le génome des deux animaux N5 à plus fort pourcentage de génome receveur est alors analysé pour contrôler la qualité du processus de speed congenic.
En conclusion, au moins deux animaux hétérozygotes de statut microbiologique SOPF (test Harlan 52M) seront retournés au client afin d'établir la nouvelle colonie congenic. À chaque génération, un rapport intermédiaire est envoyé au client récapitulant les résultats de l'analyse de microsatellite, et informatif quant au choix du fondateur pour la prochaine génération.
L'avantage significatif du procédé speed congenic est le temps gagné (18 - 24 mois) en comparaison avec des techniques traditionnelles de croisement.
Par l'analyse du génome à chaque génération, le fondateur le plus approprié pour la génération suivante peut être vérifié. Dans la technique traditionnelle de croisement, il n'y a pas cette étape de contrôle du génome, qui peut amener des résultats inattendus et indésirables. Notre but est de fournir les modèles génétiquement vérifiés pour votre recherche.
Ce dont nous avons besoin du client :